среда мюллер хинтон для чего

Мюллер-Хинтон агар

Мюллер-Хинтон агар

Mueller-Hinton Agar

Также известно, как M-H Agar

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности патогенных микроорганизмов к антибиотикам и сульфаниламидам Кирби-Бауэра и Эриксона.

Описание

Агар Мюллера-Хинтона изначально был разработан для первичной изоляции менингококков и гонококков.

При добавлении крови данная среда становится оптимальной для роста Neisseria. Также она становится более эффективной при повторном нагревании и превращении в шоколадный агар. Среду не следует переплавлять или повторно нагревать после добавления крови.

Приготовление

Добавить 38 г порошка в 1 л дистиллированной воды и дать настояться. Вскипятить до полного растворения среды. Стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС.

Техника посева

Для культуры Neisseria достигаются наилучшие результаты при проведении инкубации во влажной камере с атмосферой, обогащенной СО₂. Если отсутствует возможность использования анаэростата, данные условия можно создать при помещении чашек в сосуд со свечой. Атмосфера внутри сосуда обогащена СО₂ в количестве от 5 до 8%.

Агар Мюллера-Хинтона зарекомендовал себя, как одна из наиболее эффективных сред для использования в тестировании на антимикробную чувствительность. Без добавления крови данную среду можно использовать для тестирования на чувствительность к сульфонамиду, поскольку среда свободна от большинства антагонистов (нуклеотиды и т.д.). При проведении данного анализа следует исследовать зоны ингибирования спустя 12-18 часов, перед возникновением чрезмерного роста, поскольку после 24 часов инкубации он может исказить результаты теста на чувствительность к сульфонамиду. Использование малого количества посевного материала способствует раннему образованию зон ингибирования. Количество инокулята должно быть в 100-300 раз меньше, чем используется для тестирования других антибиотиков. Данная среда была предложена ВОЗ в 1970 году для тестирования на антимикробную чувствительность и с тех пор широко используется. Тестирование на чувствительность можно проводить различными методами, как на твердой, так и в жидкой среде. Наиболее часто используемым в повседневной работе методом является тест Кирби-Бауэра, рекомендованный Американской Ассоциацией Клинических Патологов.

Метод Кирби-Бауэра является точной полуколичественной системой тестирования. В нем используется агар Мюллера-Хинтона и диски с высокой концентрацией антибиотика.

Посевной материал стандартизуют по МакФарланду, производят инокуляцию чашки мазком, погруженным в стандартизированную суспензию, после этого размещают на чашке диски на равном расстоянии друг от друга и проводят инкубацию (см. таблицу).

Некоторые авторы полагают, что посевной материал следует модифицировать путем внесения двойного слоя инокулированной среды. При использовании данной системы, несомненно, образуются более тонкие и выраженные зоны ингибирования. Чашки инкубируют при 37°С в течение ночи и после этого измеряют зоны ингибирования. Результаты интерпретируют как Устойчивый, Умеренно Устойчивый (Средний) и Чувствительный штамм (см. таблицу).

В методе Эрикссона, принятом в большинстве европейских стран, используется стандартизованная культуральная среда (Мюллер-Хинтон), стандартизованное количество на чашку (25 мл на чашку диаметром 9 см) и стандартизованная концентрация посевного материала.

Используемую суспензию свежей культуры инкубируют в течение 18 часов в жидкой среде и затем готовят соответствующие разведения, чтобы убедиться в достаточном росте на агаре в течение 15 минут.

Рекомендуемые разведения:

—Enterobacteria- Pseudomonas: разведение 1/300

—Staphylococcus- Enterococcus: разведение 1/300

—Streptococcus- Haemophilus: разведение 1/10

Посевной материал вносят на чашку путем заливки на ее поверхность. Избыточный посевной материал удаляют стерильной пипеткой и распределяют на чашке соответствующим образом диски с антибиотиком. За 30-60 минут перед инкубацией разрешается провести предиффузионный период для медленной диффузии антибиотика перед ростом. После инкубации при 37°С в течение 12-18 часов производят измерение зон ингибирования и построение регрессионных кривых. Результаты приводят в терминах «Чувствительный» или «Резистентный», или в значениях минимальной ингибиторной концентрации.

Метод Эрикссона, несомненно, является более точным и надежным, чем метод Кирби-Бауэра. Тем не менее, метод Кирби, являющийся полуколичественным, более прост и легок в ежедневном использовании. Использование метода Эрикссона высоко рекомендовано при необходимости получения высокой эффективности и точности.

Чашки со средой Мюллера-Хинтона можно хранить при охлаждении в пластиковых пакетах в течение месяца без ущерба для результатов тестирования на чувствительность. Однако, не следует их использовать при любых признаках дегидратации среды. Агар Мюллера-Хинтона производства компании Scharlau соответствует требованиям ВОЗ для проведения тестов на микробную чувствительность; проверка его основных характеристик производится в каждой партии. Тем не менее, иногда может иметь место некоторая вариабельность результатов. Следует отметить ряд факторов, которые могут являться причиной вариабельности:

Дополнительную информацию по проведению тестирования на чувствительность с использованием дисков с антибиотиками можно получить в Монографии М2-А9 CLSI (ранее – NCCLS).

Интерпретация зон подавления роста наиболее распространенных антибиотиков, согласно методу Кирби-Бауэра

Антибиотик

Концентрация

Диаметр зоны задержки роста (в мм)

Устойчивость

Умеренная устойчивость

Источник

Агар / Бульон Мюллера-Хинтона

Определение чувствительности к триметоприму и сульфаниламидам на агаре Мюллера-Хинтона (M173),
видны четкие зоны задержки роста: у Escherichia coli (вверху слева),
Staphylococcus aureus (вверху справа) и Enterococcus faecalis (внизу)

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 38,0 г порошка М173 или 21,0 г порошка М391 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Агар Мюллера-Хинтона, в соответствии с общепринятым стандартом NCCLS, рекомендуется для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам диско-диффузионным методом (1). Бульон Мюллера-Хинтона используют для определения минимальной ингибирующей концентрации (МПК) антимикробных средств в отношении аэробных бактерий (2). Среду рекомендовали также использовать для проведения тестов чувствительности с диском, пропитанным антибиотиком в высокой концентрации (3).

Гидролизат казеина и мясной настой источником углерода, азота, серы, витаминов и других важных факторов для роста микроорганизмов. Крахмал выступает в роли защитного коллоида, нейтрализующего токсические вещества, образуемые в среде при культивировании. Гонококки и менингококки растут на этой среде очень хорошо. Стандартизованную суспензию испытуемого микроорганизма растирают тампоном по поверхности среды. Затем на поверхность среды укладывают бумажные диски, пропитанные определенной концентрацией того или иного антибиотика. После инкубирования измеряют диаметр зон, образовавшихся вокруг дисков. На результаты исследования диско-диффузионным методом оказывают влияние различные факторы: густота инокулюма, толщина агаровой пластинки, количество антибиотика в диске, рН среды, выработка бета-лактамаз испытуемым микроорганизмом (4). Ввиду высокой воспроизводимости результатов агар Мюллера-Хинтона рекомендован экспертами ВОЗ для проведения тестов чувствительности микроорганизмов (5).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,7%-ному агаровому гелю (М173).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М173 (3,8% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, а водный раствор М391 (2,1% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 37°С.

Источник

Агар Мюллера-Хинтона: основа, подготовка и применение

Содержание:

В Мюллер-Хинтон агар Это твердая неселективная питательная среда, состоящая из мясного настоя, кислого казеинового пептона, крахмала, агара и дистиллированной воды. Эта среда обеспечивает отличный микробный рост для большинства быстрорастущих бактерий.

Первоначально он был создан Джоном Ховардом Мюллером и Джейн Хинтон для выделения таких питательных бактерий, как Neisseria gonorrhoeae Y Neisseria meningitidis.Однако благодаря своим характеристикам он оказался идеальным для изучения чувствительности к антибиотикам, обеспечивая надежные и воспроизводимые результаты.

Таким образом, агар Мюллера-Хинтона является культуральной средой, принятой Институтом клинических и лабораторных стандартов (CLSI) и Европейским комитетом по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам для проведения теста на чувствительность к противомикробным препаратам методом дисковой диффузии Кирби и Бауэр.

Основа

Поскольку это неселективная питательная среда, она отлично подходит для роста большинства патогенных бактерий.

С другой стороны, его простой состав позволяет веществам легко диффундировать на нем, что является важной характеристикой для теста на чувствительность методом дисковой диффузии.

Другой его характеристикой является то, что он содержит небольшое количество ингибиторов, что позволяет эффективно оценивать сульфонамиды, триметоприм и тетрациклины.

Однако следует иметь в виду, что среда должна соответствовать определенным условиям для обеспечения ее надлежащего функционирования, в том числе:

Вы также должны знать, что методология стандартизирована и поэтому должны быть соблюдены все параметры, такие как:

Концентрация посевного материала, концентрация и хранение дисков с антибиотиками, размещение соответствующего количества дисков на агаре, расстояние между одним диском и другим, стратегическое размещение определенных антибиотиков, атмосфера, температура и время инкубация.

Подготовка

Взвешивают 37 г обезвоженной среды Мюллера-Хинтона и растворяют в 1 литре дистиллированной воды. Нагрейте среду, помешивая, чтобы она растворилась. Варить 1 минуту.

Автоклав для стерилизации при 121 ° C в течение 15 минут. При извлечении из автоклава колбу следует поместить на водяную баню при 50 ° C для охлаждения. Разлить по 25–30 мл в стерильные чашки Петри диаметром 10 см.

Пластины должны быть средней толщины 4 мм (идеальная), допускается диапазон 3-5 мм.

Если необходимо приготовить кровяной агар с использованием агара Мюллера-Хинтона в качестве основы, перед подачей на чашки налейте 5% стерильную и дефибринированную кровь ягненка.

Конечный pH среды должен быть от 7,2 до 7,4.

Инвестируйте и храните в холодильнике до использования. Перед использованием дайте пластине нагреться до комнатной температуры.

Приложения

Он используется для проведения теста на чувствительность или чувствительность к антибиотикам для большинства быстрорастущих нетребовательных патогенов.

Если в агар добавляется кровь, его используют для проведения антибиотикограммы таких требовательных микроорганизмов, как:Пневмококк, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, среди прочего. Он также использовался для изоляции Легионелла пневмофила.

Методика антибиограммы

Перед выполнением антибиотикограммы необходимо использовать бактериальный раствор, эквивалентный 1,5 x 10 8 клетки.

Для этого отбирают от 3 до 4 колоний чистой культуры и суспендируют в бульоне с триптиказой сои или в бульоне Мюллера-Хинтона, инкубируют в течение 2-6 часов и концентрацию корректируют стерильным физиологическим раствором, сравнивая ее со стандартом Mac Farland 0,5%.

Если они требуют микроорганизмов, колонии можно суспендировать непосредственно до концентрации 0,5% Mac Farland. Затем на чашку Müeller Hinton засевают тампон, пропитанный приготовленным бактериальным раствором.

Для этого тампон погружают в раствор, а затем удаляют лишнюю жидкость, нажимая на стенки пробирки. Сразу после этого тампон проводят по всей поверхности, не оставляя нетронутых мест, затем пластину слегка поворачивают и снова засевают. Операция повторяется еще 2 раза.

Дайте постоять 10 минут, а затем вставьте диски с антибиотиками стерильными щипцами, оставив между ними зазор 24 мм. Поместив каждый диск на агар, слегка надавите на каждый диск щипцами, чтобы убедиться, что они хорошо прилегают.

По завершении процесса планшет переворачивают и инкубируют при 35-37 ° C в условиях аэробиоза в течение 16-18 часов. Если это требовательный микроорганизм, он может иметь микроаэрофилию, и если антибиотикограмма содержит диски оксациллина, ее следует прочитать через 24 часа.

Для измерения диаметра каждого ореола используется линейка. Результаты следует записать в мм. Впоследствии полученные значения соотносятся с таблицами точек отсечки, опубликованными в текущем руководстве CLSI.

Укажите как чувствительный (S), промежуточный (I) или устойчивый (R), в зависимости от обстоятельств.

Антибиотики выбираются в зависимости от изолированного микроорганизма и типа инфекции, которую он вызывает.

Иногда необходимо принимать во внимание стратегическое размещение антибиотиков, чтобы показать образцы фенотипической устойчивости.

Стратегическое размещение дисков на агаре Мюллер-Хинтон

Для Enterobacteriaceae диск с клавулановой кислотой должен быть помещен против цефалоспоринов 3-го и 4-го поколения.Расширение в форме яйца указывает на то, что штамм является продуцентом бета-лактамаз расширенного спектра действия (БЛРС). Это означает, что пациента нельзя лечить цефалоспоринами.

При стафилококке важно поместить диск с эритромицином или азитромицином перед диском с клиндамицином (D-тест).

Устойчивый ореол в эритромицине и уплощение в ореоле клиндамицина указывает на то, что штамм обладает штаммом индуцируемой резистентностью к клиндамицину (ICR). Это означает, что лечение клиндамицином не будет эффективным.

Для поиска индуцибельных штаммов AMP C в Enterobacteriaceae и некоторых неферментирующих грамотрицательных палочках диски цефтазидима, цефокситина или пиперациллина тазобактана обращены к диску имипенема на расстоянии 27 мм.

Уплощенный ореол на одном из дисков, обращенных к имипенему, указывает на присутствие индуцибельного AMP C.

Для поиска конститутивного C-AMP диск клоксациллина 500 мкг обрабатывают цефтазидимом (30 мкг) и цефотаксимом (30 мкг) на расстоянии 25 мм. Расширенный ореол в любом из цефалоспоринов указывает на позитив.

Клоксациллиновый диск можно также заменить на 9-миллиметровый диск из фильтровальной бумаги Whatman № 6, пропитанный фенилборной кислотой (400 мкг), на расстоянии 18 мм. Интерпретируется так же, как и предыдущий.

Наконец, чтобы исследовать продукцию металлобеталактамаз, особенно в Синегнойная палочкаиспользуется диск, пропитанный 10 мкл этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА 750 мкг) и тиогликолевой кислоты (SMA 300 мкг), который обращен к дискам имипенема и меропенема на расстоянии 15 мм.

Тест считается положительным, если наблюдается расширение ореолов имипенема или меропенема в направлении диска EDTA / SMA. Этот результат должен быть подтвержден модифицированным тестом Ходжа.

Этот метод заключается в инокуляции штамма кишечная палочкаATCC 25922 на пластине Мюллера-Хинтона. Диск имипенема помещается в центр пластины, а затем делается полоса от диска к периферии с деформацией P. aeruginosa подозрительно. На одну чашку можно тестировать до 4 штаммов.

Тест будет положительным при наличии зоны искажения ореола имипенема вокруг растяжки.

Причины ошибочных результатов

— Плохо сохраненные диски с антибиотиками могут вызвать ложную резистентность. Например, оксациллиновый диск очень уязвим к перепадам температуры.

— pH среды ниже указанного (кислая) дает меньшие ореолы у аминогликозидов и макролидов (риск ложной резистентности) и большие ореолы у пенициллина, тетрациклина и новобиоцина (риск ложной чувствительности).

-Если pH выше указанного (щелочной), описанные выше эффекты меняются на противоположные.

-Средства с высокими концентрациями тимина и тимидина оказывают влияние, значительно уменьшая ореолы ингибирования сульфаниламидов и триметоприма.

-Высокие концентрации кальция и магния вызывают ложную резистентность аминогликозидов, полимиксина B и тетрациклинов к штаммам Синегнойная палочка.

-Низкие концентрации кальция и магния вызывают ложную чувствительность аминогликозидов, полимиксина B и тетрациклинов к штаммам Синегнойная палочка.

-Присутствие цинка влияет на результаты работы дисков карбапенема (имипенем, меропенем и эртапенем).

-Мобилизация дисков на антибиотикограмме даст деформированные ореолы, так как разряд антибиотиков происходит немедленно.

— Очень слабые посевные материалы влияют на результаты, поскольку в агаре не будет равномерного или сплошного роста, что является необходимым условием для измерения ореолов ингибирования, в дополнение к тому факту, что ореолы могут давать больше, чем обычно.

— Чрезмерно загруженный посевной материал может давать ореолы меньшего размера, чем обычно.

-Несоблюдение расстояния между дисками приводит к наложению одного ореола на другой, и они не могут быть правильно прочитаны.

-Инкубировать с CO₂ увеличивается размер ореолов тетрациклиновых и метициллиновых дисков.

-Инкубирование при температуре ниже 35 ° C дает более крупные ореолы.

-Добавление крови уменьшает размер ореола сульфамида.

Ограничение

Чувствительность антибиотика, продемонстрированная на антибиотикограмме, против микроорганизма (in vitro) нет гарантии, что он будет работать in vivo.

QA

Чтобы узнать, содержит ли среда достаточное количество тимина, необходимо выращивать штамм. Enterococcus faecalis ATCC 29212 и тест на чувствительность к триметоприм сульфаметоксазолу (SXT), он должен давать ореол, равный или> 20 мм, чтобы считаться удовлетворительными.

Ссылки

Публикационная предвзятость в психологии: что это такое и почему вызывает проблемы

Рак поджелудочной железы: причины, симптомы и лечение

Источник

Agar Müeller Hinton фонд, подготовка и использование

Мюллер Хинтон Агар Это твердая неселективная питательная среда, состоящая из мясного настоя, пептона казеиновой кислоты, крахмала, агара и дистиллированной воды. Эта среда обеспечивает отличное микробное развитие наиболее быстро растущих бактерий..

Первоначально он был создан Джоном Говардом Мюллером и Джейн Хинтон для изоляции питательных бактерий, таких как Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitidis. Однако благодаря своим характеристикам он оказался идеальным для изучения чувствительности к антибиотикам, обеспечивая надежные и воспроизводимые результаты..

По этой причине агар Мюллера Хинтона является культуральной средой, принятой Институтом клинических и лабораторных стандартов (CLSI) и Европейским комитетом по тестированию антимикробной чувствительности, для проведения теста на антимикробную чувствительность методом диффузии дисков Кирби. Bauer.

фундамент

Поскольку это неселективная питательная среда, она отлично подходит для роста большинства патогенных бактерий..

С другой стороны, его простой состав делает вещества легко диффундирующими на нем, что является важной характеристикой для теста на восприимчивость методом диффузии на диске..

Другая его особенность заключается в том, что он содержит небольшое количество ингибиторов, что позволяет эффективно оценивать сульфонамиды, триметоприм и тетрациклины..

Однако следует учитывать, что среда должна удовлетворять определенным условиям для обеспечения ее надлежащего функционирования, в том числе:

Мы также должны знать, что методология стандартизирована и, следовательно, должны быть соблюдены все параметры, такие как:

Концентрация инокулята, концентрация и сохранение антибиотических дисков, размещение на агаре соответствующего количества дисков, расстояние между дисками и другим, стратегическое размещение определенных антибиотиков, атмосфера, температура и время инкубация.

подготовка

Взвесить 37 г обезвоженной среды Мюллера-Хинтона и растворить в 1 л дистиллированной воды. Нагрейте среду при перемешивании, чтобы растворить ее. Пусть кипятят 1 минуту.

Возьмите автоклав для стерилизации при 121 ° С в течение 15 минут. При извлечении из автоклава фиолу следует поместить в водяную баню при температуре 50 ° С для охлаждения. Налейте 25-30 мл в стерильные чашки Петри диаметром 10 см..

Пластины должны иметь среднюю толщину 4 мм (идеально) с допустимым диапазоном 3-5 мм..

Если необходимо приготовить кровяной агар с использованием агара Мюллера Хинтона, 5% стерильную и дефибринированную кровь ягненка переливают перед подачей на чашки..

Конечный pH среды должен составлять от 7,2 до 7,4..

Инвестируйте и храните в холодильнике до использования. Разрешить пластине принять комнатную температуру перед использованием.

приложений

Он используется для проведения теста на восприимчивость к антибиограмме или антибиотикам для большинства быстрорастущих патогенов..

Если агар дополнен кровью, он служит для выполнения антибиограммы требовательных микроорганизмов, таких как: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp., Neisseria meningitidis, среди других. Он также был использован для изоляции Legionella pneumophila.

Техника антибиограммы

Перед выполнением антибиограммы необходимо приготовить бактериальный раствор, эквивалентный 1,5 х 10. 8 клетка.

Для этого от 3 до 4 колоний отбирают из чистой культуры и суспендируют в триптиказном соевом бульоне или в бульоне Мюллера-Хинтона, инкубируют в течение 2-6 часов и концентрацию корректируют стерильным физиологическим раствором, сравнивая его со стандартом Mac Farland. 0,5%.

Если они требуют микроорганизмов, колонии могут быть приостановлены непосредственно, пока они не достигнут концентрации 0,5% Mac Farland. Затем на пластину Мюллера Хинтона замачивают тампоном, пропитанным приготовленным бактериальным раствором..

Для этого опустите тампон в раствор, а затем удалите излишки жидкости, прижавшись к стенкам трубки. Сразу после того, как тампон пройден по всей поверхности, не оставляя нетронутых участков, затем слегка поверните пластину и заново высейте. Операция повторяется еще 2 раза.

Дайте постоять 10 минут, а затем поместите диски с антибиотиками стерильными щипцами, оставив пространство между ними 24 мм. После размещения каждого диска на агаре слегка прижмите каждый из них зажимом, чтобы убедиться, что они хорошо прилипли.

После окончания процесса планшет переворачивают и инкубируют при 35-37 ° С при аэробиозе в течение 16-18 часов. Если это требовательный микроорганизм, может потребоваться микроаэрофилия, и если антибиограмма содержит диски с оксациллином, ее следует прочитать через 24 часа..

Линейка используется для измерения диаметра каждого гало. Результаты должны быть записаны в мм. Впоследствии полученные значения соотносятся с таблицами точек среза, опубликованными в текущем руководстве CLSI..

Сообщите как чувствительный (S), промежуточный (I) или устойчивый (R), в зависимости от обстоятельств.

Антибиотики выбираются в соответствии с выделенным микроорганизмом и типом возникающей инфекции.

Иногда стратегическое размещение антибиотиков должно отражать фенотипические паттерны резистентности..

Стратегическое размещение дисков на агаре Мюллера Хинтона

Для энтеробактерий диск с клавулановой кислотой должен быть помещен перед цефалоспоринами 3-го и 4-го поколения. Расширение в форме яйца указывает на то, что штамм является продуцентом бета-лактамаз расширенного спектра (ESBL). Это означает, что пациент не должен лечиться никаким цефалоспорином.

При стафилококке важно поместить диск с эритромицином или азитромицином перед диском с клиндамицином (D-тест).

Устойчивый гало в эритромицине и уплощение в гало клиндамицина указывает на то, что штамм обладает индуцибельной устойчивостью к клиндамицину, штамм (RIC). Это означает, что лечение клиндамицином не будет эффективным.

Для поиска индуцибельных штаммов AMP C в Enterobacteriaceae и некоторых неферментирующих грамотрицательных бациллах диски с цефтазидимом, цефокситином или пиперациллином тазобактаном сталкиваются с диском имипенема на расстоянии 27 мм..

Ореол, сплющенный в одном из дисков, обращенных к имипенему, указывает на присутствие индуцибельного AMP C.

Для поиска конститутивного AMP C диск с клоксациллином в 500 мкг сталкивают с цефтазидимом (30 мкг) и с цефотаксимом (30 мкг) на расстоянии 25 мм. Расширенный ореол в одном из цефалоспоринов указывает на позитивность.

Диск клоксациллина также можно заменить на 9 мм диск из фильтровальной бумаги Whatman № 6, пропитанный фенилбороновой кислотой (400 мкг), на расстоянии 18 мм. Интерпретируется так же, как и предыдущий.

Наконец, для изучения производства металло-бета-лактамаз, особенно в Pseudomonas aeruginosa, диск, пропитанный 10 мкл этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA 750 мкг) и тиогликолевой кислоты (SMA 300 мкг), который обращен к дискам имипенема и меропенема, используется на расстоянии 15 мм..

Тест положительный, если имеется расширение ореолов имипенема или меропенема в направлении диска EDTA / SMA. Этот результат должен быть подтвержден модифицированным тестом Ходжа.

Этот метод заключается в прививке штамма Кишечная палочка ATCC 25922 на табличке Мюллера Хинтона. Имипенемный диск помещают в центр пластины, а затем из диска к периферии делают канавку с деформацией P. aeruginosa подозрительный. Вы можете проверить до 4 штаммов на пластину.

Тест будет положительным, если вокруг стрии будет зона искажения ореола имипенема..

Причины ошибочных результатов

-Диски с плохо сохранившимися антибиотиками могут вызывать ложное сопротивление. Например, диск из оксациллина очень чувствителен к изменениям температуры.

-Значение pH среды ниже указанного (кислоты) приводит к образованию меньших ореолов в аминогликозидах и макролидах (риск ложной резистентности) и больших ореолов в пенициллине, тетрациклине и новобиоцине (риск ложной чувствительности).

-Если pH выше указанного (щелочного), эффекты, описанные выше, меняются местами..

-Среды с высокими концентрациями тимина и тимидина оказывают существенное влияние на снижение гало ингибирования сульфонамидов и триметоприма.

-Высокие концентрации кальция и магния вызывают ложную устойчивость аминогликозидов, полимиксина B и тетрациклинов к штаммам Pseudomonas aeruginosa.

-Низкие концентрации кальция и магния вызывают ложную чувствительность аминогликозидов, полимиксина B и тетрациклинов к штаммам Pseudomonas aeruginosa.

-Присутствие цинка влияет на результаты работы карбапенемных дисков (имипенем, меропенем и эртапенем).

-Толщина среды ниже 3 мм дает ложные результаты чувствительности, в то время как толщина выше 5 будет давать ложные сопротивления.

-Мобилизация дисков на антибиограмме даст деформированные ореолы, так как выброс антибиотика происходит немедленно.

— Очень слабые инокуляты влияют на результаты, так как в агаре не будет равномерного или слитого роста, что является необходимым условием для измерения зон ингибирования, в дополнение к тому факту, что гало могут давать больше, чем обычно..

-Перегруженная инокулят может дать ореолы меньше, чем обычно.

-Несоблюдение расстояния между дисками приводит к тому, что один ореол перекрывает другой и не может быть правильно прочитан.

-Инкубировать с СО₂ увеличивает размер ореолов тетрациклиновых и метициллиновых дисков.

-Инкубация при температуре ниже 35 ° C приводит к образованию более крупных ореолов.

-Добавление крови уменьшает размер гало сульфонамидов.

ограничение

Чувствительность антибиотика, продемонстрированная на антибиограмме против микроорганизма (в пробирке) не является гарантией того, что это будет работать в естественных условиях.

Контроль качества

Чтобы узнать, содержит ли среда нужное количество тимина, следует высеять штамм. Enterococcus faecalis ATCC 29212 и проверить чувствительность к триметоприму сульфаметоксазолу (SXT), он должен дать значение гало, равное или> 20 мм, чтобы быть удовлетворительным.

Источник