Неферментирующие грамотрицательные микроорганизмы что это
НЕФЕРМЕНТИРУЮЩИЕ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ
Неферментирующие грам-отрицательные бактерии — гетерогенная группа бактерий, не вызывающих процессов брожения.
Большинство Неферментирующих грамотрицательных бактерий, исследуемых в бактериол. лабораториях, следует рассматривать как условно-патогенные микроорганизмы (см.). Частота их выделения из клин, материала и объектов окружающей среды составляет ок. 15%. Неферментирующие грамотрицательные бактерии относятся к различным таксономическим подразделениям, они встречаются среди представителей рода Agrobacterium — A. radiobacter, рода Acinetobacter — A. calcoaceticus (син. Hereljea vaginicola, Bacterium anitratum, Moraxella lwoffi), рода Alcaligenes — A. denitrificans, A. faecalis (син. A. odorans), A. xylosoxidans (син. Achromobacter xylosoxidans), рода Bordetella — B. bronchiseptica (син. B. bronchicanis), рода Flavobacterium — F. meningosepticum, F. odoratum, рода Flavobacter — F. breve, F. multvo-rum, F. spiritivorum, рода Kingella — K. kingae, K. denitrificans, K. indologenes, рода Moraxella — M. bovis, M. lacunata (син. M. liquefaciens), M. atlantae, M. nonliquefaciens, var. oxidans, M. osloensis, M. phenylpyruvica, M. urethralis, более 20 видов рода Pseudomonas — Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens, Ps. mallei, Ps. pseudomallei, Ps. putida и др.
Неферментирующие грамотрицательные бактерии не образуют спор, многие имеют капсулу. Среди них встречаются как подвижные, так и неподвижные бактерии. У моракселл и ацинетобактера описана своеобразная «дергающая» подвижность. Многие Н. г. б. хорошо растут на обычных питательных средах. Колонии флавобактерий и нек-рых псевдомонад пигментированы. Большинство Н. г. б. утилизирует органические соединения путем окисления без образования газообразных продуктов; все Н. г. б. не продуцируют ацетилметилкарбинола. За исключением ацинетобактера и нек-рых видов псевдомонад, эти бактерии оксидазоположительны. Эйкенеллы и кингеллы не образуют каталазы. Н. г. б. являются строгими аэробами, хотя нек-рые псевдомонады и ацинетобактер способны к анаэробному росту в присутствии нитратов. Флавобактерии и кингеллы обладают слабой ферментативной активностью. Среди Н. г. б. определяются как высокочувствительные к антимикробным агентам, так и устойчивые к ним штаммы. Устойчивость часто контролируется плазмидными генами (см. Плазмиды). Многие Н. г. б. обладают повышенной чувствительностью к высокой температуре, но радиорезистентны. Содержание гуанин + цитозин в ДНК этих микроорганизмов колеблется в пределах 31—74,5 молъ%.
Главные места обитания Н. г. б.— вода и почва; выделяют их и из пищевых продуктов, подвергнутых замораживанию или воздействию ионизирующего излучения, а также обнаруживают в организме здоровых людей и животных.
В патогенезе заболеваний, вызываемых Н. г. б., основная роль принадлежит эндотоксинам. Эти бактерии часто вызывают лизис эритроцитов, как обусловленный продукцией гемолизинов, так и не связанный с ними. При заболеваниях человека Н. г. б. составляют до 20% от общего числа выделяемых гемокультур, почти в 10% случаев выделяются из желчи и мочи у лиц с поражениями желчевыводящей и мочеполовой систем. Ок. 7% культур, выделяемых при глазных инфекциях, являются Н. г. б. Увеличивается число пневмоний, менингитов, послераневых инфекций и других заболеваний, вызываемых этими бактериями. Внутрибольничные инфекции, связанные с Н. г. б., нередко заканчиваются летально.
Библиогр.: Литовченко П. П. и Заботина И. В. Морфологические, культуральные и биохимические свойства культур синегнойных бактерий, выделенных от больных людей, животных и из объектов внешней среды, Журн. микр., эпид. и иммун-, № 5, с. 78, 1981; Шендеров Б. А. и Серкова Г. П. Неферментирующие грамотрицательные бактерии, Сообщ. 2, Moraxella, там же, № 3, с. 14, 1979; они же, Неферментирующие грамотрицательные бактерии, Сообщ. 3, Acinetobacter, там же, № 5, с. 9; они же, Простые схемы идентификации неферментирующих грамотрицательных бактерий, в кн.: Вопр. биохимии и физиол. микроорганизмов, под ред. В. В. Игнатова и др., в. 8, с. 60, Саратов, 1980; Holmes В., Owen R. J. a. Hollis D. G. Flavobacterium spi-ritivorum, a new species isolated from human clinical specimens, Int. J. system. Bact., v. 32, p. 157, 1982; Manual of clinical microbiology, ed. by E. H. Lennette a. o., p. 263, 288, Washington, 1980; Owen R. J. a. Jackman P. J. H. The similarities between Pseudomonas pau-cimobilis and allied bacteria derived from analysis of deoxyribonucleic acids and electrophoretic protein patterns, J. gen. Micros biol., v. 128, p. 2945, 1982; Yabuuchi E., Yamanaka K. a. Ohyama A. Evaluation of 36 Minitek tests and a new approach for identification ofnonfer-menters, J. clin. Microbiol., v. 13, p. 572, 1981.
Активность антибактериальных средств in vitro
Грамотрицательные неферментирующие микроорганизмы широко распространены в окружающей среде. Одной из серьезных проблем является диагностика вызванных ими инфекций, связанная с объективными трудностями их выделения и идентификации. Второй проблемой является то, что для них характерна полирезистентность к антимикробным препаратам, включая те, которые обычно активны против Pseudomonas aeruginosa.
В данном исследовании определялась антибактериальная активность in vitro различных препаратов по отношению к 177 выделенным в клинике штаммам неферментирующих бактерий (кроме Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter spp.). МПК определялась методом разведений в агаре. Использовали среду Мюллера-Хинтона. Оценивали активность ампициллина, пиперациллина, пиперациллин/тазобактама, сульбактама, цефоперазона, цефоперазон/сульбактама, цефтазидима, цефепима, азтреонама, имипенема, меропенема, колистина, гентамицина, амикацина, триметоприм/сульфаметоксазола, хлорамфеникола, эритромицина, рифампицина, норфлоксацина, ципрофлоксацина и миноциклина.
У 7 изолятов: Sphingobacterium multivorum(2), Sphingobacterium spiritivorum(1), Empedobacter brevis(1), Weeksella virosa(1), Bergeyella zoohelcum(1) и Oligella urethralis (1), вместо чувствительности к цефоперазону или сульбактаму определяли чувствительность к амоксициллин/клавуланату и ампициллин/сульбактаму.
Полирезистентность к антибактериальным препаратам была характерна для таких возбудителей, как Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, Chryseobacterium spp., Myroides spp., Achromobacter xylosoxidans и Ochrobactrum anthropi.
В то же время, такие микроорганизмы, как Pseudomonas stutzeri, Shewanella putrefaciens-algae, Sphingomonas paucimobilis, Pseudomonas oryzihabitans, Bergeyella zoohelcum, Weeksella virosa и Oligella urethralis часто были чувствительны к большинству из тестируемых антибиотиков.
Учитывая, что различные виды возбудителей, образующих группу грамотрицательных неферментирующих микроорганизмов, демонстрируют различные показатели антибиотикорезистентности, для выбора оптимальной схемы лечения требуется проведение микробиологического исследования с идентификацией возбудителя и выявления показателей его антибиотикорезистентности. Феномен полирезистентности, характерный для ряда возбудителей, требует активной разработки новых антибактериальных средств или поиска новых комбинаций антибиотиков, обладающих синергизмом бактерицидного действия по отношению к данным микроорганизмам.
«In vitro» activity of different antimicrobial agents on Gram-negative nonfermentative bacilli, excluding Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter spp. (Vay C.A., Almuzara M.N., Rodriguez C.H., Pugliese M.L., Lorenzo Barba F., Mattera J.C., Famiglietti A.M. Rev. Argent Microbiol., 2005;37(1):34-45).
Код вставки на сайт
Активность антибактериальных средств in vitro
Грамотрицательные неферментирующие микроорганизмы широко распространены в окружающей среде. Одной из серьезных проблем является диагностика вызванных ими инфекций, связанная с объективными трудностями их выделения и идентификации. Второй проблемой является то, что для них характерна полирезистентность к антимикробным препаратам, включая те, которые обычно активны против Pseudomonas aeruginosa.
В данном исследовании определялась антибактериальная активность in vitro различных препаратов по отношению к 177 выделенным в клинике штаммам неферментирующих бактерий (кроме Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter spp.). МПК определялась методом разведений в агаре. Использовали среду Мюллера-Хинтона. Оценивали активность ампициллина, пиперациллина, пиперациллин/тазобактама, сульбактама, цефоперазона, цефоперазон/сульбактама, цефтазидима, цефепима, азтреонама, имипенема, меропенема, колистина, гентамицина, амикацина, триметоприм/сульфаметоксазола, хлорамфеникола, эритромицина, рифампицина, норфлоксацина, ципрофлоксацина и миноциклина.
У 7 изолятов: Sphingobacterium multivorum(2), Sphingobacterium spiritivorum(1), Empedobacter brevis(1), Weeksella virosa(1), Bergeyella zoohelcum(1) и Oligella urethralis (1), вместо чувствительности к цефоперазону или сульбактаму определяли чувствительность к амоксициллин/клавуланату и ампициллин/сульбактаму.
Полирезистентность к антибактериальным препаратам была характерна для таких возбудителей, как Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, Chryseobacterium spp., Myroides spp., Achromobacter xylosoxidans и Ochrobactrum anthropi.
В то же время, такие микроорганизмы, как Pseudomonas stutzeri, Shewanella putrefaciens-algae, Sphingomonas paucimobilis, Pseudomonas oryzihabitans, Bergeyella zoohelcum, Weeksella virosa и Oligella urethralis часто были чувствительны к большинству из тестируемых антибиотиков.
Учитывая, что различные виды возбудителей, образующих группу грамотрицательных неферментирующих микроорганизмов, демонстрируют различные показатели антибиотикорезистентности, для выбора оптимальной схемы лечения требуется проведение микробиологического исследования с идентификацией возбудителя и выявления показателей его антибиотикорезистентности. Феномен полирезистентности, характерный для ряда возбудителей, требует активной разработки новых антибактериальных средств или поиска новых комбинаций антибиотиков, обладающих синергизмом бактерицидного действия по отношению к данным микроорганизмам.
Неферментирующие грамотрицательные микроорганизмы что это
СОГЛАСОВАНО Зам. начальника Главного управления научно-исследовательских институтов и координации научных исследований В.М.Христюк 2 июня 1986 г.
УТВЕРЖДАЮ Заместитель министра К.И.Акулов 3 июня 1986 г.
АННОТАЦИЯ
Методические рекомендации предназначены для бактериологических лабораторий санитарно-эпидемиологических станций и лечебно-профилактических учреждений.
Московский НИИ гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана
Институт хирургии им. А.В.Вишневского АМН СССР
II МОЛГМИ им. Н.И.Пирогова
МОНИКИ им. М.Ф.Владимирского
Санитарно-эпидемиологическая станция Москворецкого района г. Москвы
Методические рекомендации составили: доктор мед. наук В.В.Влодавец, канд. мед. наук Г.М.Трухина, М.Н.Смирнова, профессор И.И.Колкер, канд. биол. наук О.К.Борисова, Н.В.Гаврилова, канд. мед. наук С.С.Белокрысенко, канд. мед. наук С.К.Канарейкина, канд. мед. наук В.В.Якименко.
ВВЕДЕНИЕ
Внутрибольничные гнойно-септические заболевания представляют собой актуальную проблему современного здравоохранения. Они снижают эффективность лечения в стационарах, увеличивают сроки госпитализации, повышают летальность, наносят значительный экономический ущерб. Наиболее восприимчивыми к внутрибольничным инфекциям являются больные хирургических и урологических стационаров, а также родовспомогательных учреждений.
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Объектами исследования являются:
— кожа рук обслуживающего персонала;
2. ОТБОР ПРОБ НА ИССЛЕДОВАНИЕ И ВЫДЕЛЕНИЕ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ
Исследование воздушной среды
Бактериологическому контролю подлежит воздух следующих объектов: операционных, перевязочных, палат, отделений реанимации и интенсивной терапии.
При отборе проб в жидкие питательные среды следует строго соблюдать горизонтальное положение прибора. Объем исследуемого воздуха должен составлять от 500 до 1000 л при скорости отбора проб 125 л в минуту. Отбор воздуха в помещениях стационара производят на уровне дыхания лежащего больного.
При отсутствии прибора ПАБ-1 исследования воздуха на грамотрицательную микрофлору проводят методом седиментации. Чашки Петри с элективными средами без крышек помещают на горизонтальные поверхности (стол, подоконник, тумбочка и др.) и выдерживают 2-4 часа. В месте забора используют не менее 2 чашек с одной и той же питательной средой.
Не рекомендуется для выделения из воздуха грамотрицательных потенциально патогенных бактерий использовать щелевой прибор Кротова из-за его недостаточной эффективности в этих случаях. В порядке исключения при отборе проб прибором Кротова количество исследуемого воздуха должно составлять не менее 250-500 л при скорости протягивания воздуха 25 л в минуту.
Посев воздуха проводится на модифицированную среду Эндо или в жидкие среды накопления: мясопептонный бульон, 1% пептонную воду с последующим подращиванием в термостате в течение 16-18 часов при 37 °С. Далее осуществляется пересев из жидких питательных сред накопления на модифицированную среду Эндо, которую выдерживают в термостате 18-24 часа при 37 °С. Выросшие на среде Эндо колонии различают по их внешнему виду (размер, окраска, характер поверхности и краев). Для дальнейшего исследования выделенных микроорганизмов отбирают не менее двух колоний одного вида.
Питательные среды, тест-реактивы, растворы индикаторов указаны в Приложении 2.
Отбор проб (смывы) с предметов обихода, аппаратуры, кожи рук обслуживающего персонала
Бактериологическому контролю подлежат следующие объекты:
— в операционных и перевязочных: операционный, перевязочный стол, стол медицинской сестры, щетки для мытья рук (чистые), поверхность раковин, таз для мытья рук, кран раковины, перчатки, кожа рук персонала;
— наркозная аппаратура: внутренняя поверхность наркозной маски, внутренняя поверхность тройника наркозного аппарата, наружная поверхность ларингоскопа, внутренняя поверхность гофрированных шлангов, внутренняя поверхность деталей клапанов вдоха и выдоха, поверхность адсорбирующего вещества (адсорбент), внутренняя поверхность увлажнителя, внутренняя поверхность воздуховодов, внутренняя поверхность интубационной трубки, наружная поверхность интубационной трубки;
— в палатах для больных: кровати, прикроватные тумбочки, дверные ручки.
Кроме вышеперечисленных предметов, подлежащих бактериологическому контролю, в случае необходимости могут быть подвергнуты исследованию выборочно и другие объекты. По эпидпоказаниям дополнительно проводят отбор проб с предметов, находящихся в употреблении («грязных»).
Отбор проб осуществляется методом смывов.
Смывы с поверхностей предметов обихода, аппаратуры, кожи рук обслуживающего персонала при качественной оценке результатов производят стерильным ватным тампоном на стеклянных или деревянных стержнях, вмонтированных в пробирки с 5 мл стерильной 1% пептонной водой (накопительная среда) выше ее уровня. Тампон увлажняют питательной средой, делают смыв с объекта и снова помещают в пробирку, погружая его в пептонную воду. После отбора пробы с наркозной аппаратуры тампон помещают в пробирку с 5 мл стерильного мясопептонного бульона.
Бактериологические исследования проводят не позднее, чем через 2-4 часа с момента отбора проб. До исследования пробы хранят при температуре +4-+8 °C. Каждая проба, отобранная из объекта окружающей среды стационара, должна иметь направление, включающее следующие пункты: 1) название отделения, 2) место взятия, 3) дата и время взятия, 4) вид материала, направляемого на исследование, 5) фамилия и должность отбирающего.
Отбор патологического материала
Материалом для бактериологического исследования являются гной, экссудаты, пунктаты, выпот, биоптаты, ткани, мазки из ран, фекалии, моча, рвотные массы и т.д.
Биоптаты ран получают путем иссечения участка ткани (весом 0,2-1 г) из глубоких слоев раны после тщательной ее обработки физиологическим раствором и 70° этиловым спиртом, для удаления поверхностно вегетирующей микрофлоры, а также антисептических и антибактериальных препаратов.
При бактериологическом анализе испражнений исследованию подлежат только утренние фекалии. Предварительное применение очистительных клизм и прием слабительных средств противопоказаны. Во избежание искажения истинного содержания микробов материал должен быть доставлен в лабораторию возможно быстрее после дефекации. Фекалии отбирают в специальную стерильную посуду (бактериологические чашки, флаконы с широким горлом). Первые порции кала (из ампула ректи), содержащие, как правило, более высокое, чем в других отделах кишечника, количество микроорганизмов, исследованию не подлежат.
Для исследования мочи следует брать среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных мочеполовых органов. Мочу собирают в стерильную пробирку в количестве 3-5 мл и немедленно доставляют в лабораторию.
Отбор проб рвотных масс производится в соответствии с существующими инструкциями по исследованию пищевых токсико-инфекций и интоксикаций. Патологический материал доставляют в лабораторию не позднее чем через 1-1,5 часа с момента взятия. Если немедленная доставка невозможна, образцы хранят в холодильнике при температуре +4-+6 °С. Каждый образец патологического материала должен быть снабжен этикеткой, на которой указывается: 1) отделение, в котором находится больной, 2) фамилия, имя, отчество больного, 3) возраст больного, 4) номер истории болезни, 5) основной диагноз и диагноз осложнения, 6) проводимая химио- и антибиотикотерапия, 7) место взятия материалов, 8) вид материала, 9) дата и время взятия пробы, 10) фамилия лечащего врача.
Посев патологического материала производят на любую из трех плотных питательных сред: модифицированную среду Эндо, 5% кровяной агар, питательный агар Дагестанского НИИ питательных сред. Посевы выдерживают в термостате при 37 °С в течение 18-24 часов. Выросшие на этих средах колонии различают по их внешнему виду (размер, окраска, характер поверхности и краев). Для дальнейшего исследования выделенных микроорганизмов отбирают не менее трех колоний одного вида.
3. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
Группу неферментирующих бактерий при госпитальных инфекциях обычно представляют микроорганизмы родов: Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Flavobacterium. Это грамотрицательные мелкие палочки или коккобациллы, обладающие подвижностью или неподвижные, неспорообразующие аэробы, цитохромоксидазанегативные или цитохромоксидазаположительные, не ферментирующие глюкозу, имеющие нередко пигмент.
Идентификация указанных микроорганизмов начинается с изучения их морфологии в мазках, приготовленных из колоний на плотных питательных средах и окрашенных по Граму. При обнаружении грамотрицательных мелких палочек, а также коккобактерий их отсевают на скошенный мясопептонный агар с целью накопления посевного материала и одновременно в среду OF (среда Хью-Лейфсона). Посевы выдерживают в термостате в течение 18-24 часов при 37 °С. Затем учитывают результаты посева на среде OF (рис.1).
Рис.1. Выделение грамотрицательных потенциально патогенных микроорганизмов
Грамотрицательные бактерии, оксидирующие и ферментирующие глюкозу, изменяют первоначальный зеленый цвет среды OF на желтый. В таком случае результат учитывают как +/+ и данные микроорганизмы относят к семейству Enterobacteriaceae с последующей идентификацией.
Грамотрицательные микроорганизмы, оксидирующие, но не ферментирующие глюкозу (+/-) или не оксидирующие и не ферментирующие ее (-/-), относят к группе неферментирующих бактерий с последующей идентификацией.
Идентификация грамотрицательных потенциально патогенных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae
Идентификацию грамотрицательных потенциально патогенных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae проводят в два этапа. Первым этапом определяют родовую принадлежность бактерий по минимальному набору тестов. Культуру с поверхности скошенного агара исследуют на наличие цитохромоксидазы. Далее цитохромоксидазаотрицательные колонии засевают в короткий пестрый ряд из 7 тестов. Определяют подвижность, утилизацию цитрата, продукцию индола, реакцию с метиловым красным, ферментацию рамнозы, дезаминирование фенилаланина и декарбоксилирование орнитина.
Родовая дифференциация потенциально патогенных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae
Журнал «Болезни и антибиотики» 1 (6) 2012
Вернуться к номеру
Неферментирующие бактерии в аспекте множественной антибиотикорезистентности возбудителей внутрибольничных инфекций
Авторы: Демиховская Е.В., Росток, Германия
Версия для печати
В статье дана общая характеристика группы неферментирующих бактерий, показано их клиническое значение.
Summary. In the article there is presented a general description of nonfermentative bacteria, their clinical significance had been shown.
Резюме. У статті дана загальна характеристика групи неферментуючих бактерій, показане їх клінічне значення.
Неферментирующие бактерии, резистентность, антибиотики.
Key words: nonfermentative bacteria, resistance, antibiotics.
Ключові слова: неферментуючі бактерії, резистентність, антибіотики.
Мы продолжаем знакомство с «плохими парнями» из команды ESKAPE, которые, по мнению Американского общества инфекционных болезней (Infectious Diseases Society of America — IDSA), доставляют клиницистам больше всего проблем, связанных с резистентностью к антибиотикам [1]. На этот раз в фокусе внимания окажутся А: Acinetobacter baumanii и Р: Pseudomonas aеruginosa. Оба эти микроорганизма относятся к так называемым неферментирующим бактериям (НФБ), обладающим некоторыми общими свойствами, в том числе множественной антибиотикорезистентностью. Поэтому мы не ограничимся исключительно двумя видами микроорганизмов, а рассмотрим эту группу шире.
Общая характеристика группы неферментирующих бактерий
Группа грамотрицательных аэробных бактерий получила название неферментирующих благодаря тому, что в отличие от огромного семейства Enterobacteriaceae не ферментирует (разлагает) глюкозу, а использует ее оксидативно. Все неферментирующие бактерии неприхотливы к питательным средам, но некоторые, например Stenotrophomonas maltophilia, растут медленней, чем наиболее типичный представитель группы Pseudomonas aeruginosa — синегнойная палочка. Этот вид бактерий, открытый в XIX веке, получил свое первое название Bacterium pyocyaneum изза синезеленого цвета гноя, из которого он был впервые выделен. Благодаря золотистому блеску (aeruginosa) и незабываемому цветочному запаху колоний синегнойную палочку трудно перепутать с другими бактериями на питательных средах.
В табл. 1 представлены основные роды неферментирующих грамотрицательных бактерий, имеющие значение в патологии человека. Кроме двух возбудителей — P.aeruginosa и A.baumanii, названных Американским обществом инфекционных болезней в числе наиболее проблемных для лечения антибиотиками, указаны S.maltophilia и B.cepacia, а также некоторые другие представители родов Stenotrophomonas и Burkholderia. Род Ralstonia был сравнительно недавно выделен из рода Burkholderia в отдельную таксономическую группу, хотя его основной представитель R.pickettii был замечен как возбудитель оппортунистических инфекций еще под старым названием Burkholderia рickettii. Некоторые дифференциальные признаки из табл. 1, имеющие значение для рутинной лабораторной диагностики, могут быть полезны для первичной ориентировки. Микробиология была и остается последним оплотом, где все органы человеческого восприятия имеют значение и нелегко поддаются замене бездушной техникой. Тот, кто однажды ощутил жасминовый запах и сланцевый блеск колоний синегнойной палочки, безошибочно распознает ее вновь. Однако в XXI веке продолжается повсеместное наступление объективной «алгебры» в сферу субъективной «гармонии» органов чувств человека в применении к диагностике. Современные биохимические анализаторы и особенно методы, основанные на генетическом анализе, вносят существенную корректировку в идентификацию и систематизацию микроорганизмов. Так, например, идентификация бактерий рода Acinetobacter до вида является практически неразрешимой задачей в рутинной лаборатории. Только новый метод MALDITOF может достоверно отличить бактерии группы Acinetobacter baumanii, куда входят Acinetobacter pittii и А.nosocomialis, от бактерий других видов Acinetobacter. При этом именно группа A.baumanii ассоциируется с тяжелыми инфекциями. Другие виды Acinetobacter постоянно встречаются в пробах из внешней среды и по праву считаются маловирулентными.
Все НФБ любят влагу и широко распространены во внешней среде: воде, почве, растениях. Попав в условия закрытого помещения, например больничного стационара, они не только хорошо сохраняются, но могут даже размножаться в любых влажных местах: туалетах, душах, в сосудах с различными растворами, включая цветочные вазы. Однако синегнойная палочка и другие НФБ в небольшом количестве содержатся также в составе нормальной микрофлоры человека в кишечнике, слизистой носоглотки, на коже. Поэтому не исключено эндогенное происхождение оппортунистических инфекций, вызванных этой группой бактерий. Разумеется, при нахождении возбудителей в нестерильных жидкостях и полостях, а также в открытых ранах необходимо дифференцировать инфекцию и колонизацию.
Клиническое значение неферментирующих бактерий
За исключением Burkholderia pseudomallei — возбудителя конкретной нозологической формы — мелиоидоза, все остальные НФБ вызывают оппортунистические инфекции без определенной локализации и патогномоничных симптомов. Вызовет ли Acinetobacter spp. или Stenotrophomonas spp. пневмонию или сепсис, зависит от места внедрения возбудителя, и в первую очередь — от защитных сил организма пациента. Однако в результате многолетних клинических наблюдений стало возможным обобщить некоторые особенности инфекций, вызванных P.aeruginosa и A.baumanii.
P.aeruginosa [2]
Синегнойная палочка является типичным условнопатогенным микроорганизмом. Обладая многочисленными факторами вирулентности (токсинами, адгезинами и т.д.), она встречается у 3–5 % здоровых людей на коже, в носоглотке и кале. Колонизация синегнойной палочки переходит в инфекцию у пациентов с иммунодефицитами, особенно у больных муковисцидозом и диабетом.
Среди амбулаторных инфекций, вызванных P.aeruginosa, следует упомянуть патогномоничный наружный отит («ухо пловца»), возникающий после посещения бассейна, а также дерматит, циститы, кератит (в связи с контактными линзами). Из системных внебольничных инфекций описаны случаи эндокардита и остеомиелита позвоночника у внутривенных наркоманов, в основном молодых мужчин.
Однако наибольшую проблему представляет внутрибольничная P.aeruginosaинфекция. В больницах США P.aeruginosaинфекции регистрируются в среднем у 4 пациентов на 1000 выписанных (0,4 %) [3]. P.aeruginosa — четвертый по частоте выделения возбудитель, который отвечает за возникновение 10 % госпитальных инфекций. При этом доля штаммов, резистентных как к фторхинолонам, так и к карбапенемам, постоянно увеличивается. Наиболее часто поражается мочевой тракт после катетеризации. Порядка 12 % уретральных инфекций в условиях стационара вызваны P.aeruginosa. Уретральная инфекция у ослабленных пациентов нередко осложняется сепсисом. На долю уросепсиса приходится около 40 % всех P.aeruginosaбактериемий. Не менее частым источником синегнойной септицемии является желудочнокишечный тракт (ЖКТ). В течение 72 ч после госпитализации частота носительства в ЖКТ увеличивается от 3 % у здоровых людей до 20 % у пациентов стационаров. P.aeruginosa может поражать любой участок ЖКТ от глотки до прямой кишки, вызывая инфекции различной степени тяжести — от банального гастроэнтерита до некротического энтероколита.
Кожа и мягкие ткани также легко подвергаются синегнойной инфекции, естественно, если имеются первичные поражения: раны, мокнутия, ожоги. Ожоговая синегнойная инфекция характеризуется тяжелым течением и высокой летальностью, сопоставимой с острыми системными инфекциями, такими как пневмония, сепсис, менингиты.
Системные синегнойные инфекции встречаются исключительно у пациентов с иммунодефицитами. Особенно злокачественно протекают пневмонии у больных с муковисцидозом. Колонизация легких муковисцидозных больных встречается очень часто, и элиминировать синегнойную палочку в таких случаях практически невозможно.
P.aeruginosа составляет около 25 % всех госпитальных грамотрицательных бактериемий.
A.baumanii [4]
A.baumanii описан как возбудитель тяжелых инфекционных состояний, таких как сепсис, пневмония, менингит, раневая и уретральная инфекция. Летальность пациентов с ацинетобактерным сепсисом и вентиляторассоциированной пневмонией, вызванной A.baumanii, доходит до 52 % [5], нейрохирургических больных с менингитом — до 73 % [6]. Однако тяжелые основные заболевания пациентов интенсивных стационаров всегда оставляют сомнение в том, была ли Acinetobacterинфекция причиной или всего лишь свидетелем смерти больного. Так, было показано, что ассоциированная с Acinetobacterинфекцией летальность составляет от 7,8 до 23 % [7].
Пневмонии, вызванные A.baumanii, составили в США 5–10 % всех пневмоний в интенсивных стационарах и характеризуются более длительным пребыванием в стационаре и высокой летальностью. A.baumanii относится к шести наиболее частым возбудителям внутрибольничных и вентиляторассоциированных пневмоний в мире [8].
Внебольничные пневмонии, вызванные A.baumanii, были до сих пор описаны только в тропических регионах Австралии и ЮгоВосточной Азии. При этом они возникали преимущественно у пациентов с иммунодефицитами или по крайней мере с отягчающими сопутствующими факторами, такими как диабет, хроническая обструктивная болезнь легких, алкоголизм, курение. Характерным было фульминантное течение с бактериемией и высокой летальностью (40–60 %) [9].
Бактериемия/сепсис A.baumanii была изолирована в 1,3 % из 25 000 случаев мономикробных бактериемий, проанализированных в США. С показателем заболеваемости 0,6 на 10 000 госпитализированных пациентов A.baumanii была отнесена к 10 самым частым возбудителям, вызывающим бактериемию [10]. Особенностью бактериемий, вызванных A.baumanii, является сравнительно позднее возникновение (в среднем через 26 дней после госпитализации). Наряду с первичными катетерассоциированными бактериемиями описаны также вторичные инфекции после уретральной, раневой инфекций или пневмонии. Факторами риска для возникновения A.baumaniiбактериемии в мультивариантном анализе были названы пневмонии, гематологоонкологическое основное заболевание, мужской пол, опухоли и предшествующая нозокомиальная инфекция [11]. Летальность A.baumaniiбактериемии, вызванной карбапенемрезистентными штаммами, составила 46 % по сравнению с летальностью в 28,3 % при бактериемии, вызванной карбапенемчувствительными штаммами A.baumanii [12].
Раневая инфекция колонизация A.baumanii на коже здоровых людей является первичным фактором риска возникновения раневых и ожоговых инфекций. Частота госпитальной раневой A.baumaniiинфекции в интенсивных стационарах составляет в общем не более 2 %. Однако у раненых солдат, задействованных в Ираке и Афганистане, A.baumanii была выделена в 32,5 % случаев [13].
Резистентность к антибиотикам
Основной вопрос клинициста к микробиологу — чем лечить? Антибиотикограмма выделенного возбудителя — главное, что попрежнему интересует врача, получившего ответ из лаборатории. Однако, глубокоуважаемый коллега, не спешите переворачивать страницу, пропустив латинское название возбудителя, количественный и качественный состав микрофлоры посланного на анализ материала. Именно эти сведения вместе с клинической симптоматикой помогут вам ответить на вопрос: имеет ли место инфекция, которую действительно нужно лечить антибиотиками, или только колонизация, которую лечить бесполезно, а с учетом спектра рекомендованных антибиотиков — еще и не безвредно для больного.
Только приняв решение о целесообразности антибиотикотерапии, вы можете приступить к углубленному изучению антибиотикограммы или, за неимением последней, заглянуть в любой из многочисленных справочников по выбору антибиотиков на основании микробиологического диагноза. Именно этиологический диагноз инфекции поможет рациональному назначению антибиотикотерапии, исключив заведомо бездейственные группы препаратов. В эру антибиотиков с многочисленными названиями групп и генериков нелегко разобраться не только клиницисту, но и микробиологу. С целью облегчения и правильной интерпретации лабораторных исследований чувствительности к антибиотикам группа европейских экспертов (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing — EUCAST) выработала правила тестирования антимикробных препаратов и интерпретации результатов для клинического применения. В октябре 2011 года опубликовано второе издание «Правил. » от экспертов EUCAST, доступное в Интернете [14].
НФБ являются заведомо мультирезистентными. Это обусловлено наличием первичной, конституциональной невосприимчивости ко многим группам антибиотиков, которая в англоязычной литературе получила название intrinsic resistance. Объясняется эта резистентность тем, что особым образом организованная клеточная стенка грамотрицательных бактерий не пропускает антибиотик внутрь. Это свойство было присуще псевдомонадам и другим НФБ со времен их самостоятельного, безобидного существования во внешней среде, но оказалось чрезвычайно полезным в борьбе за расширение сфер обитания вплоть до человека. Позднее было доказано, что, кроме пониженной проницаемости клеточной стенки, конституциональная резистентность усиливается наличием активного удаления (помпа, насос, efflux) антибиотиков из бактериальной клетки.
Эта первичная резистентность делает бесполезным применение и нецелесообразным тестирование чувствительности выделенных от пациента НФБ к пенициллину, ампициллину, цефалоспоринам 1го и 2го поколения (цефазолин, цефокситин, цефамандол, цефуроксим), гликопептидам, макролидам, фузидиевой кислоте, линкозамидам, стрептограмину, рифампицину, даптомицину и линезолиду.
Кроме этого, НФБ могут обладать дополнительными, приобретенными (acquired) механизмами резистентности, а именно:
1. Продукция ферментов, разлагающих антибиотики, чаще всего хромосомных bлактамаз Amp C (цефалоспорины третьего поколения и пенициллины широкого спектра).
2. Ферментативная инактивация антибиотиков путем модификации (аминогликозиды).
3. Потеря транспортных белков (поринов), осуществляющих доставку антибиотика внутрь клетки (карбапенемы).
В табл. 2 приведены данные EUCAST о первичной резистентности основных представителей НФБ к другим, кроме перечисленных выше, группам антибиотиков.
Как видно из табл. 2, представители группы НФБ обладают избирательной восприимчивостью к теоретически действенным антибиотикам. Например, колистин (полимиксин В), который изза повышенной токсичности используется чаще как диагностический препарат для идентификации НФБ in vitro, остается последним оплотом в борьбе с P.aeruginosa и A.baumanii и в то же время абсолютно не действует на B.cepacia. Аналогичная ситуация наблюдается с триметопримом/сульфаметоксазолом (котримоксазол), который является препаратом выбора для лечения инфекций, вызванных S.maltophilia и B.cepacia, но числится в списке бесполезных антибиотиков в отношении P.aeruginosa в связи с избирательной резистентностью синегнойной палочки к триметоприму. Карбапенемы, которые имеют очень широкий спектр действия, принципиально не действуют на S.maltophilia. Особо следует обсудить чувствительность НФБ к аминогликозидам. S.maltophilia и B.cepacia природно устойчивы ко всем аминогликозидам, что объясняется плохой проницаемостью клеточной стенки для этой группы антибиотиков и активным их эффлюксом. S.maltophilia дополнительно продуцирует ферменты, модифицирующие аминогликозиды. P.aeruginosa природно устойчива только к канамицину и неомицину. Такая мозаичность, избирательность действия различных антибиотиков в пределах группы похожих бактерий (НФБ) еще раз развенчивает миф клиницистов о существовании универсальных антибиотиков, подходящих для лечения любой оппортунистической инфекции, и еще раз подтверждает целесообразность микробиологической диагностики для назначения эффективной антибиотикотерапии. Однако полученные in vitro результаты тестирования должны быть должным образом интерпретированы, прежде чем будут применены для назначения антибиотикотерапии. Примеры такой интерпретации по согласованию с экспертами EUCAST приведены в примечаниях к табл. 2.
По правилам EUCAST, в случае, если тестирование in vitro все же продемонстрировало некоторую чувствительность к антибиотикам, обозначенным как недействующие (R), следует интерпретировать это как артефакт (ошибка тестирования). При отсутствии альтернативы и повторном тестировании антибиотик можно применить, но с осторожностью.
Кроме первичной резистентности в правилах EUCAST упоминается существование определенных микроорганизмов с исключительной (выходящей за рамки правил) резистентностью (Exceptional Resistance Phenotypes). Именно эти, пока еще редко встречающиеся микроорганизмы, например ванкомицинорезистентные стафилококки или пенициллинорезистентные стрептококки, привлекают особое внимание исследователей. Появление таких фенотипов является началом новой тенденции в развитии антибиотикорезистентности. Так происходило, например, с бактериями семейства Enterobacteriaceae, устойчивыми к карбапенемам. Еще несколько лет назад такие бактерии встречались очень редко. Сейчас доля карбапенемоустойчивых клебсиелл и кишечных палочек доходит до нескольких процентов от клинически значимых изолятов. Тенденции в антибиотикорезистентности можно проследить по данным EARSNet — системы слежения за антибиотикорезистентностью при Европейском центре по контролю за инфекциями (ECDC). Для P.aeruginosa ведется сбор и анализ данных в отношении резистентности к карбапенемам, фторхинолонам, аминогликозидам, цефтазидиму и пиперациллину/тазобактаму. Так же, как и в случае с ESBLпродуцентами, среди бактерий семейства Enterobacteriaceae частота встречаемости мультирезистентной P.aeruginosa в Южной и Восточной Европе значительно выше, чем в Северной и Центральной (EARSNet).
Что касается A.baumanii, наибольшее внимание привлекает распространение резистентности к карбапенемам. Механизм резистентности ацинетобактеров к карбапенемам связан прежде всего с наличием карбапенемаз класса В (металлоbлактамазы). Молекулярноэпидемиологические исследования в Германии показали, что в 79 % случаев устойчивость к карбапенемам ассоциируется с наличием у A.baumanii карбапенемазы группы ОХА23 [15].
Неферментирующие бактерии в аспекте больничной гигиены
Основное свойство неферментирующих бактерий, определяющее принципы гигиенических мероприятий в условиях стационаров, — способность выживать во внешней среде в условиях влажности. Туалеты, души, рукомойники, влажные тряпки, а также цветочные вазы, физиологический раствор, детали медицинских приборов для инвазивных процедур — все, что так или иначе содержит нестерильную влагу, может быть обсеменено неферментирующими бактериями. Особое внимание уделяется в последние годы карбапенемоустойчивым штаммам A.baumanii, которые вызывают нарастающее число вспышек внутрибольничных инфекций. Настоятельная необходимость установления контроля над вспышками в стационарах привела к появлению множества публикаций, посвященных изучению путей распространения A.baumaniiинфекции и рекомендаций по ее профилактике [16].
Источником A.baumanii может являться сам пациент благодаря носительству на здоровой коже (до 1 % обследованных) или в желудочнокишечном тракте (у 10 % больных при поступлении в стационар и около 40 % после длительного пребывания в палатах интенсивной терапии) [17]. Длительное носительство мультирезистентного A.baumanii среди персонала по примеру метициллинорезистентного стафилококка в литературе не описано, хотя несоблюдение гигиенической дезинфекции рук постоянно называется как один из факторов возникновения и поддержания внутрибольничных вспышек A.baumaniiинфекции [18]. Среди других грамотрицательных бактерий, которые, как правило, не устойчивы к высыханию, Acinetobacter spp. является исключением и способен длительно выживать во внешней среде, включая сухие поверхности [19]. Резервуаром возбудителя могут служить медицинские инструменты [20]. Особенно настораживают сообщения об аэрогенной передаче A.baumaniiинфекции, возможной в случае локализации возбудителя в дыхательных путях [21].
В США и некоторых европейских странах, включая Германию, разработаны рекомендации для контроля и профилактики распространения мультирезистентных возбудителей, в том числе P.aeruginosa и A.baumanii, в условиях стационара. При этом особое внимание уделяется степени мультирезистентности возбудителя к антибиотикам. Согласно классификации антибиотикорезистентных микроорганизмов, предложенной экспертами ECDC, в зависимости от числа групп недейственных антибиотиков различают мультирезистентные (multidrug MDR), экстенсивнорезистентные (extensive drug XDR) и панрезистентные (pandrugresistant PDR) микроорганизмы [22]. Комиссия по больничной гигиене и инфекционному контролю при Институте Роберта Коха (Германия) предложила другую, клинически функциональную классификацию различных типов резистентности грамотрицательных бактерий с указанием групп антибиотиков, потерявших свое действие в отношении соответствующих изолятов [23] (табл. 3).
Обе современные классификации мультирезистентности микроорганизмов предназначены для организации инфекционного контроля, поэтому не обременены сведениями о генетических механизмах антибиотикорезистентности (например, ESBL и т.д.). Немецкая классификация, к тому же, конкретно указывает на препараты выбора, обязательные для тестирования определенного возбудителя.
Наиболее строгие мероприятия, включающие обязательную изоляцию пациента в отдельной палате и обследование контактных лиц, предпринимаются при обнаружении в стационаре карбапенемоустойчивых A.baumanii и P.aeruginosa, т.е. так называемых панрезистентных или, согласно немецкой классификации, 4МРГНмикроорганизмов.
Крайняя мера прерывания вспышек внутрибольничных инфекций — закрытие стационара для новых поступлений с проведением тщательной чистки и заключительной дезинфекции. Именно вспышки, вызванные карбапенемоустойчивыми штаммами A.baumanii, с нарастающей частотой по сравнению с другими бактериальными возбудителями приводили к закрытию стационаров в последние годы [24].
Однако не устанем повторять, что наиболее действенное и универсальное профилактическое и противоэпидемическое мероприятие при нозокомиальных инфекциях любого генеза — это строгое соблюдение стандартов гигиены, включая дезинфекцию рук персонала, методов асептики и антисептики.
1. IDSA Report. Bad Bugs, No Drugs: No ESKAPE! An Update from the Infectious Diseases Society of America // Clin. Infect. Dis. — 2009. — 48. — 112.
3. National Nosocomial Infections Surveillance System Report, data summary from January 1992 through June 2004, issued October 2004 // Am. J. Infect. Control. — 2004. — 32. — 47085.
4. Wisplinghoff H., Seifert Н. Infektionen mit Acinetobacter baumannii — Klinische Bedeutung und Therapieoptionen (Clinical features and therapeutic options of Acinetobacter baumannii infections. Клиническое значение и лечение Acinetobacter baumanniiинфекции. — нем.) // Hyg. Med. — 2012. — 37. — 1/2. — 815.
5. Cisneros J.M. Bacteremia due to Acinetobacter baumannii: epidemiology, clinical findings, and prognostic features // Clin. Infect. Dis. — 1996. — 22. — 102632.
6. Khan F.Y., Abukhattab M., Baager K. Nosocomial postneurosurgical Acinetobacter baumannii meningitis: a retrospective study of six cases admitted to Hamad General Hospital, Qatar // J. Hosp. Infect. — 2011; Dec 6.
7. Falagas M.E., Rafailidis P.I. Attributable mortality of Acinetobacter baumannii: no longer a controversial issue // Crit. Care. — 2007. — 11. — 134.
8. Jones R.N. Microbial etiologies of hospitalacquired bacterial pneumonia and ventilatorassociated bacterial pneumonia // Clin. Infect. Dis. — 2010. — 51 (Suppl. 1). — S817.
9. Ong C.W., Lye D.C., Khoo K.L., Chua G.S., Yeoh S.F., Leo Y.S. et al. Severe communityacquired Acinetobacter baumannii pneumonia: an emerging highly lethal infectious disease in the AsiaPacific // Respirology. — 2009 Nov. — 14(8). — 12005.
10. Wisplinghoff H., Bischoff T., Tallent S.M., Seifert H., Wenzel R.P., Edmond M.B. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study // Clin. Infect. Dis. — 2004 Aug 1. — 39(3). — 30917.
11. Kang C.I., Chung D.R., Peck K.R., Song J.H. Clinical predictors of Pseudomonas aeruginosa or Acinetobacter baumannii bacteremia in patients admitted to the ED // Am. J. Emerg. Med. — 2011; Oct 24.
12. Sheng W.H., Liao C.H., Lauderdale T.L., Ko W.C. et al. A multicenter study of risk factors and outcome of hospitalized patients with infections due to carbapenemresistant Acinetobacter baumannii // Int. J. Infect. Dis. — 2010; Sep. — 14(9). — e7649.
13. Griffith M.E., Ellis M.W., Murray C.K. Acinetobacter nares colonization of healthy US soldiers // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. — 2006 Jul. — 27(7). — 7878.
14. EUCAST: Expert rules in antimicrobial susceptibility testing, Version 2, Oct. 2011 http://www.eucast.org/fileadmin/src/media/PDFs/EUCAST_files/EUCAST_SOPs/EUCASTExpertrulesv2CMI.pdf
15. Kaase М. Carbapenemasen bei Acinetobacter baumannii: Molekulare Epidemiologie in Deutschland und Hinweise zur Diagnostik. (Карбапенемазы Acinetobacter baumannii: молекулярная эпидемиология в Германии и рекомендации по диагностике. — нем.) // Hyg. Med. — 2012. — 37. — 1/2. — 1619.
16. Wendt С. Empfehlungen zu Hygienemaßnahmen zur Prävention der Übertragung von Acinetobacter baumannii (Рекомендации по гигиеническим мероприятиям для профилактики передачи Acinetobacter baumannii. — нем.) // Hyg. Med. — 2012. — 37. — 1/2. — 2024.
17. Doughari H.J., Ndakidemi P.A., Human I.S., Benade S. The ecology, biology and pathogenesis of Acinetobacter spp.: an overview // Microbes Environ. — 2011. — 26(2). — 10112.
18. Roberts S.A., Findlay R., Lang S.D. Investigation of an outbreak of multidrug resistant Acinetobacter baumannii in an intensive care burns unit // J. Hosp. Infect. — 2001. — 48(3). — 22832.
19. Kramer A., Schwebke I., Kampf G. How long do nosocomial pathogens persist on inanimate surfaces? A systematic review // BMC Infect. Dis. — 2006. — 6. — 130.
20. Bernards A.T., Harinck H.I., Dijkshoorn L., van der Reijden T.J., van den Broek P.J. Persistent Acinetobacter baumannii? Look inside your medical equipment // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. — 2004. — 25(11). — 10024.
21. Moultrie D., Hawker J., Cole S. Factors associated with multidrugresistant Acinetobacter transmission: an integrative review of the literature // AORN J. — 2011. — 94(1). — 2736.
22. Magiorakos A.P., Srinivasan A., Carez R.B., Carmeli Z., Falagas M.E., Giske C.G. et al. Multidrugresistant, extensively drugresistant and pandrugresistant bacteria. An international expert proposal for interim standard definitions for acquired resistance // Clin. Microbiol. Infect. — 2012. — 18. — 268281.
23. Von Baum H., Kaase M., Meyer E., Schaumann R., SugerWiedeck H., Wendt C. Definition der Multiresistenz gegenüber Antibiotika bei gramnegativen Stäbchen im Hinblick auf Maßnahmen zur Vermeidung der Weiterverbreitung (Определение «мультирезистентность против антибиотиков» в свете мероприятий для предотвращения распространения. — нем.) // Epidemiologisches Bulletin. — 2011. — 36. — 3379.