среда сабуро для чего используют
САБУРО СРЕДЫ
САБУРО СРЕДЫ (R. J. A. Sabouraud, франц. дерматолог и миколог, 1864— 1938) — элективные среды для выращивания патогенных грибков. Предложены Р. Сабуро в 1892 г.
Сабуро среды применяют для первичного выделения из патол. материала дерматофитов, дрожжеподобных грибков и плесеней. Различают плотные и жидкие С. с. Плотные С. с. состоят из пептона (1%), глюкозы или мальтозы (4%), агар-агара (1,8—2%) и дистиллированной воды. Используют и водопроводную воду, т. к. содержащиеся в ней микроэлементы (Fe, Mg, Na, I и др.) способствуют росту грибков. Для приготовления С. с. пептон и агар в воде нагревают до растворения агара, фильтруют в горячем виде через вату и марлю, добавляют сахар, разливают в пробирки, стерилизуют 15 мин. в автоклаве при f 110°. Хим. постоянство ингредиентов определяет стандартность С. с., в частности pH (6,7 — 6,8). Оптимальный белково-углеводный состав С. с. обеспечивает развитие и выявление типичных таксономических признаков грибка-возбудителя. Слабокислая реакция в значительной мере подавляет рост посторонней микробной флоры. Эти качества С. с. позволяют применять их не только для первичного выделения грибка-возбудителя из пат. материала, но и для его идентификации. Наличие сахара в С. с. при длительном выращивании на ней грибков приводит к развитию дегенеративных изменений в макро- и микроструктуре колоний грибка и утрате ими видовых признаков (плеоморфизм). Для сохранения музейных штаммов Р. Сабуро предложил так наз. среду сохранения того же состава, но без глюкозы.
В тех случаях, когда высевают сильно подсохший или требующий большого разведения материал (кровь), удобно использовать жидкую С. с., того же состава, но без агара. Подавление роста бактерий в сильно загрязненном пат. материале осуществляют путем введения в С. с. различных антибиотиков после ее стерилизации: смесь пенициллина и стрептомицина (по 50—100 ЕД /мл каждого) либо левомицетина (0,05 мг/мл) или хлортетрациклина (100 ЕД/мл). Для подавления роста плесеней вводят актидион (0,5 мг/мл), после чего среду разливают в стерильных условиях. С той же целью применяют хим. препараты: кристаллвиолет (0,01 %), фурацилин (1 : 50 000), теллурит калия или натрия (0,015%) и др.
Библиография: Каш кин П. Н., Хохряков М. К. и К а ш к и н А. Г1. Определитель патогенных токсигенных н вредных для человека грибов, с. 48, Л., 1979; Многотомное руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней, под ред. H. Н. Жу-кова-Вережникова, т. 10, с. 177, М., 1966; Sabouraud R. Contribution & l’etude de la trichophytie humaine, Ann. Derm. Syph. (Paris), t. 3, p. 1061, 1892; о н ж e, Les teignes, P., 1910.
Материалы
Агар Сабуро с глюкозой и мальтозой используется для культивирования дрожжевых и плесневых грибов, кислотолюбивых микроорганизмов, а также для изучения антимикотиков.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 45,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ПЕРЕГРЕВАТЬ СРЕДУ. Разлить в стерильные чашки Петри.
Принцип и оценка результата:
Эта среда является модификацией среды Сабуро с глюкозой (1) и используется для культивирования дрожжевых и плесневых грибов, а также кислотолюбивых микроорганизмов. Кислое значение рН среды подавляет рост на ней большинства бактерий, что особенно полезно для культивирования грибов и кислотолюбивых микроорганизмов.
Среды с мальтозой предложены Sabouraud (1) для культивирования грибов.
Казеиновый и мясной пептоны служат источником необходимых питательных веществ для роста. Глюкоза и мальтоза являются источниками энергии.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Основа среды имеет янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, когда в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (4,5% вес/об) имеет рН 5,4 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 5 суток при 25°С.
Фонд Агар Сабуро, подготовка и использование
Сабуро агар, Также известный как агар Сабуро с декстрозой, это твердая культуральная среда, особенно обогащенная для выделения и развития грибков, таких как дрожжи, плесень и дерматофиты..
Следовательно, в микробиологической лаборатории не может быть недостатка в средствах для исследования наличия патогенных или условно-патогенных грибов, как из клинических, так и неклинических образцов. Кроме того, он также идеально подходит для роста нитчатых бактерий, таких как Streptomyces и Nocardia. Его применение очень широкое, его можно применять в микологии человека, животных, растений и промышленности..
Эта среда была создана в 1896 году известным дерматологом Раймондом Сабуро, который стал всемирно известным специалистом по заболеваниям кожи головы, главным образом вызванным дерматофитами..
Его создание было настолько важным, что оно использовалось с тех пор и продолжается сегодня, хотя и с некоторыми изменениями..
Хотя это является особенным для грибов, в этой среде бактерии могут расти, поэтому для образцов со смешанной флорой требуется включение антибиотиков в их препарат и, таким образом, подавление роста бактериальной флоры, которая может присутствовать.
Выбор антибиотика должен быть сделан с осторожностью и с учетом типа гриба, который вы хотите восстановить, так как некоторые из них подавляются в присутствии определенных веществ.
фундамент
Сабуро-декстрозный агар является средой, которая в своем первоначальном составе является слабо селективной из-за кислотного рН 5,6 ± 0,2, однако бактерии все еще могут развиваться, главным образом в длительных инкубациях.
Среда содержит казеиновый пептон и пищеварительные ткани поджелудочной железы, которые обеспечивают источник углерода и азота для развития микроорганизмов..
Он также содержит высокую концентрацию глюкозы, которая служит источником энергии, способствуя росту грибков над бактериями. Все смешано с агар-агаром, компонентом, обеспечивающим правильную консистенцию.
С другой стороны, агар Сабуро с декстрозой может быть селективным при добавлении антибиотиков..
С антибиотиками это особенно полезно в образцах раны, открытых язвах или любых образцах, в которых подозревается большое бактериальное загрязнение.
Наиболее часто используемые комбинации сабуро-декстрозного агара с антибиотиками
-Агар Сабуро с хлорамфениколом: идеально подходит для восстановления дрожжей и нитчатых грибов.
-Агар Сабуро с циклогексимидом: он особенно полезен для образцов с кожи или дыхательных путей, если подозрение вызывает диморфный гриб.
-Агар Сабуро с хлорамфениколом и циклогексимидом: используется главным образом для выделения диморфных дерматофитов и грибов. Недостатком является то, что он подавляет некоторые виды грибков Кандида но альбиканс, Aspergillus, Zygomycetes или C. neoformans.
-Агар Сабуро с хлорамфениколом, стрептомицином, пенициллином G и циклогексимидом: он идеально подходит для образцов, сильно загрязненных бактериями и сапрофитными грибами, но имеет тот недостаток, что он ингибирует рост Actinomyces и Nocardias, в дополнение к оппортунистическим грибам, упомянутым выше.
подготовка
Если у вас есть ингредиенты отдельно, вы можете приготовить их следующим образом:
Декстрозный агар Сабуро
— Отмерьте 1000 мл дистиллированной воды
Все ингредиенты смешаны, pH доведен до 5,6. Растворить растворенные вещества путем кипячения, распределить 20 мл среды в пробирках 25 х 150 мм, без фланца и с хлопковым верхом, желательно.
Другие размеры труб также могут быть использованы, в зависимости от наличия.
Они автоклавируются в течение 10 минут в атмосфере давления (121 ° C). Не превышайте время автоклавирования. При выходе из автоклава трубки наклоняются с помощью опоры, пока они не затвердеют в пике канавки..
Если доступна агаровая среда с декстрозой Sabouraud, которая уже содержит все ингредиенты, мы взвешиваем количество, указанное коммерческим предприятием, на один литр воды. Остальные этапы те же, что описаны выше..
Декстрозный агар Сабуро (модификация Эммонса)
— Отмерьте 1000 мл дистиллированной воды
Все ингредиенты смешаны, pH доведен до 6,9. Действуйте так же, как и в предыдущем случае.
Есть коммерческие дома, которые предлагают средний со всеми ингредиентами. В этом случае взвесьте и приготовьте, как описано во вставке..
Сабуро-декстрозный агар (модификация Эммонса) с хлорамфениколом
Маточный раствор хлорамфеникола
— Взвесьте 500 мг основания хлорамфеникола
— Отмерьте 100 мл 95% этанола
Агаровую среду с декстрозой Sabouraud (Emmons) готовят, как описано выше, и дополнительно на каждый литр среды добавляют 10 мл исходного раствора хлорамфеникола перед автоклавированием..
Декстрозный агар Сабуро Эммонс с циклогексимидом
Циклогексимид маточный раствор
— Весят 5 г циклогексимида
— Отмерьте 100 мл ацетона
Агаровую среду с декстрозой Сабуро (Эммонс) готовят, как уже описано, и дополнительно к каждому литру среды добавляют 10 мл исходного раствора циклогексимида перед автоклавированием..
Сабуро-декстрозный агар (Эммонс) с хлорамфениколом и циклогексимидом
Агаровую среду с сабуро декстрозой (Эммонс) готовят, как описано выше, и дополнительно к каждому литру среды добавляют 10 мл исходного раствора хлорамфеникола и 10 мл исходного раствора циклогексимида перед автоклавированием..
Другие антибиотики, которые можно добавить
От 20000 до 60000 единиц пенициллина на литр среды.
30 мг стрептомицина на литр среды.
Оба должны быть включены после автоклавирования среды, слегка охлажденной (50-55 ° C).
0,04 г неомицина на литр среды.
0,04 г гентамицина на литр среды.
Особые соображения
В целях безопасности предпочтительнее сажать декстрозный агар Сабуро в клиновидных пробирках (с наклоном в пике флейты), а не в чашках Петри, чтобы избежать рассеивания и вдыхания спор..
Важно, чтобы пробирки с агаром Сабура были покрыты хлопком, а не завинчивающейся крышкой, поскольку было показано, что полуэтаэробные условия препятствуют образованию спор, например, у некоторых штаммов. Coccidioides immitis. Кроме того, большинство грибов являются аэробными.
При использовании винтовой крышки не закрывайте плотно.
Контроль качества
Подготовленные носители должны иметь контроль качества для проверки их правильного функционирования. Для этого высевают определенные контрольные штаммы..
Для сабуро-декстрозного агара с хлорамфениколом могут использоваться штаммы ATCC. Candida Albicans, который должен иметь отличный рост. Еще одна пластинка инокулирована штаммами кишечной палочки, должен быть полностью заблокирован.
Инкубируют неинокулированную чашку, в которой не должен расти ни один микроорганизм.
Сабуро-декстрозный агар с хлорамфениколом и циклогексимидом могут быть использованы штаммы Трихофитон ментагрофиты, должен хорошо развиваться. Другая пластинка инокулирована штаммом Aspergillus flavus, в котором должен быть небольшой рост или отсутствие роста. Кроме того, инкубированный планшет инкубируют, чтобы продемонстрировать его стерильность..
Для сабуро-декстрозного агара с циклогексимидом, штаммы Candida Albicans, Трихофитон рубрум или Microsporum canis, который должен показать хороший рост.
Аналогично, штамм Aspergillus flavus, показывает скудный рост или нет роста. Наконец, инкубировать неинокулированный планшет для контроля стерильности.
приложений
Первичное выращивание
Классический сабуро-декстрозный агар содержит 4 грамма декстрозы и превосходен в качестве первичной изолирующей среды, поскольку показывает характерную морфологию каждого гриба..
Также отлично продемонстрировать производство пигментов. Однако это не самое подходящее средство для наблюдения за споруляцией.
Также не рекомендуется расти Blastomyces dermatitidis, который ингибируется высокой концентрацией присутствующей глюкозы.
С другой стороны, необходимо учитывать некоторые соображения.
По этой причине иногда необходимо использовать несколько чашек с агаром Сабуро для одного и того же образца, поскольку их часто сажают в двух экземплярах, чтобы инкубировать одну чашку при комнатной температуре и другую чашку при 37 ° С..
спорообразование
Агар с декстрозой Сабуро, модифицированный Эммонсом, содержит 2 грамма декстрозы и используется не только для выделения, но также для споруляции и консервации грибов..
В этой среде, если вы можете восстановить штаммы Blastomyces dermatitidis.
сохранение
Для сохранения грибковых культур их можно хранить в холодильнике (2-8 ° С). Время хранения может варьироваться от 2 до 8 недель. По истечении этого времени они должны быть пересевы, чтобы повторить процесс.
Содержание штамма может быть увеличено, чтобы избежать плеоморфизма, если декстроза полностью удалена из агара и если количество агара в среде уменьшается, чтобы избежать сухости.
микрокультуры
Для выявления некоторых нитчатых грибов необходимо проводить микрокультуры с использованием агара Сабуро или других специальных средств для наблюдения за структурами полового и бесполого размножения..
В микологии человека
Он используется в основном для диагностики грибковых заболеваний, особенно тех, которые влияют на кожу и ее прикрепления (волосы и ногти).
Микология животных
Грибковые инфекции часто поражают животных, поэтому агар Сабуро так же полезен для животных, как и для микологии человека..
Например, дерматофиты могут часто поражать животных. Таков случай Microsporum canis var distortum, часто заражает собак, кошек, лошадей, свиней и обезьян. также, Микроспорум гипс заражает собак, кошек и крупного рогатого скота.
Птицы, такие как цыплята, петухи и цыплята, подвержены Microsporum gallinae.
Sporothrix schenkii и Histoplasma capsulatum влияет на домашних и человеческих животных.
Экологическая микология
В экологических исследованиях сабуро декстрозный агар используется для выделения грибов.
Промышленная микология
Сабуро-декстрозный агар не может отсутствовать для изучения грибковых загрязнителей при производстве косметики, продуктов питания, напитков, кожи, текстиля и других.
Растительная микология
Растения также страдают от болезней, вызванных грибами, поражающими различные части растения, которые могут даже закончить сбор урожая, что приведет к большим потерям в сельском хозяйстве..
Среда Сабуро: основные понятия, методика проведения и результативность
Представляя собой питательную среду для выращивания грибов различной природы (дрожжевых, плесневых), среду Сабуро может различаться по своему составу и в зависимости от компонентов использоваться для самых разных целей. В практике выращивания ацидофильных бактерий, дрожжей и патогенных грибов среда Сабуро считается наиболее питательной средой, которая позволяет использовать их в лабораторных анализах и исследованиях.
Что такое среда Сабуро
Представляя собой искусственную среду для питания грибов, простейших и бактерий, среда Сабуро позволяет выращивать и подсчитывать число и исследовать качество выращиваемой среды для контроля микробной загрязненности при употреблении нестерильных лекарственных препаратов. Внешне данное средство представляет собой порошок с повышенной степенью гигроскопичности, имеющий светло-желтый оттенок.
Состав среда Сабуро иметь может следующий:
Также могут при меняться такие разновидности данного типа среды, как пептонный агар Сабуро, где основным составляющим выступает пептон, среда Сабуро на дрожжевой воде, медовая среда Сабуро (здесь вместо глюкозы или мальтозы применяется натуральный мед), среда Сабуро, предназначенная для хранения выращенных культур.
Кому назначают исследование
Поскольку основным принципом работы данной среды является определение количества и скорости развития патогенной микрофлоры, когда вычисляется на основе полученных данных число грибов различной природы в среде, а также степень развития дрожжей и ацидофильных бактерий, применяться среда Сабуро может в следующих случаях:
Основным преимуществом данной процедуры следует считать ее эффективность: даже при разовом проведении становится возможным выявить многие причины поражения кожных покровов, установить причины часто повторяющихся воспалительных процессов и абсцессов.
Зачем делать такой анализ
Назначается среда Сабуро при необходимости проведения комплексной диагностики при выявлении многих кожных заболеваний, которые вызываются активным размножением дрожжевых грибов, ацидофильных бактерий. Назначение процедуры делается врачом-дерматологом, и количество проводимых процедур также рассчитывается им. При необходимости уточнения диагноза может назначаться две и более диагностические процедуры среда Сабуро.
При неоднократном повторении данной исследовательской процедуры отрицательного воздействия на организм выявлено не было.
Виды процедуры
В зависимости от компонентов, которые применяются для проведения анализа, процедура может различаться. Наиболее часто применимыми считаются следующие ее разновидности:
Перечисленные виды имеют несколько измененный состав, однако эффективность проведения не изменяется и реакция используется для определения наличия повышенного количества дрожжевых грибов и бактерий ацидофильного типа.
О приготовлении среды Сабуро расскажет данное видео:
Показания для проведения
Противопоказания для проведения
Однако при повышенной чувствительности кожи к компонентам среды Сабуро проведение данной реакции не назначается. Используются другие методы, позволяющие диагностировать кожные заболевания и выбрать схему их лечения.
Детский возраст (до года) и беременность с противопоказаниями к проведению подобных исследований также следует считать противопоказаниями к осуществлению среды Сабуро.
Схема среды Сабуро
Безопасно ли исследование
В большей мере данная реакция для исследования микрофлоры кожи назначается при отсутствии повышенной чувствительности кожи, однако в большинстве случаев она безопасна для организма человека.
Про приготовления к проведению среды Сабуро читайте ниже.
Подготовка к процедуре
Чтобы результат проводимого анализа не был искажен, следует заблаговременно к ней подготовиться.
Сложностей в подготовке нет: накануне не рекомендуется принимать острую пищу, не употреблять алкоголь, перед процедурой при взятии образца кожи поверхность кожи полностью очищается. При приеме любых видов лекарств следует сообщить об этом лечащему врачу.
Как все проходит
Особых ощущений при исследовании микрофлоры кожи не возникает, поскольку для проведения анализа берется соскоб с кожи. Частички кожного покрова несут в себе все бактерии, которые выявляются при данной реакции.
Для выявления нарушений в составе микрофлоры, с поверхности кожи берется соскоб, который помещается в среду Сабуро. Далее проводится реакция, показывающая степень заселенности кожи определенными микроорганизмами (бактериями айидофильного происхождения, грибами).
Расшифровка результатов
Для назначения лечения следует получить точные данные реакции, и для этого требуются все знания лечащего врача с учетом всех факторов, являющихся специфическими для конкретого заболевания. По этой причине процесс расшифровки полученного анализа может проводиться только лечащим врачом-дерматологом.
О том, какова цена на питательную среду Сабуро в микробиологии, расскажем ниже.
Средняя стоимость процедуры
Цена данной процедуры зависит от места ее проведения, числа повторений процедуры и применяемого количества реактивов. Стоимость может колебаться от 1 280 до 1 970 рублей.
Еще больше полезной информации о методе Сабуро представлено в этом видео:
